Describen un protocolo para la localización intracelular y análisis del colesterol en las membranas de las células

Grupo CIBEREHD liderado por el José C. Fernández-Checa en el Instituto de Investigaciones Biomédicas de Barcelona
CIBER | jueves, 20 de enero de 2022

La alteración del metabolismo del colesterol ha sido involucrado en el desarrollo de diversas enfermedades hepáticas, como la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA) y el carcinoma hepatocelular (CHC). La revista STAR protocols (Cell Press) ha publicado un protocolo descrito por el grupo CIBEREHD liderado por el José C. Fernández-Checa en el Instituto de Investigaciones Biomédicas de Barcelona donde se describe la producción de una proteína recombinante consistente en la fusión de la Glutation-S-Transferasa con la Perfringolisina (PFO). "El producto resultante GST-PFO permite el análisis de la localización del colesterol en membranas celulares en muestras de hígado tanto humanas como procedentes de modelos experimentales con EHNA y CHC" tal como explica Leire Goicoechea primera firmante del estudio.

Análisis de la fluorescencia de GST-PFO

El análisis de la fluorescencia de GST-PFO en unión al colesterol es versátil, sensible y estable en el tiempo, a diferencia de otras aproximaciones más utilizadas hasta el momento, como la detección de colesterol por filipina. La presencia de GST permite la detección de la sonda utilizando anticuerpos anti-GST en una variedad de técnicas como immunofluorescencia, ELISA o citometría de flujo.

Como se muestra en el artículo, la aplicación de GST-PFO permite la detección de colesterol en la membrana plasmática y mitocondrial tanto en muestras de pacientes como de modelos experimentales de EHNA y CHC, observándose un incremento sustancial con respecto a las muestras controles.

Asimismo, el uso de GST-PFO en muestras de modelos de enfermedades minoritarias, como la enfermedad lisosomal de Niemann-Pick tipo C, revela un incremento de colesterol libre en la membrana lisosomal.

En resumen, "además de en EHNA y CHC, la sonda recombinante GST-PFO puede ser utilizada para la detección y diagnosis de enfermedades neurodegenerativas caracterizadas por un incremento de colesterol libre, como la enfermedad de Alzheimer", concluyen los investigadores.

 

Referencia del artículo:

L Goicoechea, F Arenas, F Castro, S Nuñez, S Torres, C Garcia-Ruiz, JC Fernandez-Checa. GST-Perfringolysin O production for the localization and quantification of membrane cholesterol in human and mouse brain and liver.

STAR Protoc, 2021 Dec 29;3(1):101068. doi: 10.1016/j.xpro.2021.101068